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克隆形成

平板克隆形成实验

     克隆形成实验检测每一个细胞扩增为一个克隆的能力,是一种在体外条件下评估细胞生存能力和增殖能力的方法。

实验步骤:

DAY1

      制备单细胞悬液,加到六孔板,每组依次(100/200/400个细胞),每孔2mL培养基,培养过夜。

DAY2-3

      加药处理48小时。

DAY4-?

      培养2-3周直到形成克隆(认为超过50个细胞的群是一个克隆),每2-3天换一次液,拍照,计数。

      mitomycin C:属烷化剂,为生物还原性抗生素,可与DNA发生交叉联结,使DNA解聚,阻止DNA的复制过程。mitomycin C为细胞周期非特异性药物,作用于G1、G2及M期,并对S/G2期有延缓作用。10μM丝裂霉素C (Mitomycin C)处理宫颈癌细胞系HeLa细胞,对照组添加等量DMSO,48小时后撤掉药物,培养一段时间后,细胞形成克隆,比较两组克隆数可知丝裂霉素C抑制了HeLa细胞增殖。

      细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞是能够贴壁并且有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力。

平板克隆实验检测沉默RSF-1的乳腺癌细胞系MCF-7/SKBR3的增殖能力

(Oncol Lett. 2018 Oct; 16(4): 4279–4284.)

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