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产品及应用

VSV病毒跨突触标记

VSV-dG病毒产品介绍

1. VSV病毒简介

VSV即:水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus) 属于弹状病毒科(Rhabdoviridae) 水泡病毒属(Vesiculovirus),是有囊膜的单股负链RNA病毒。水疱性口炎病毒主要分为两个血清型,其代表株分别为印第安纳(Indiana)株和新泽西(New Jersey)株。

1.1 VSV的基因组及其编码的蛋白

VSV病毒呈子弹状结构,是不分节段的单股负链RNA病毒。基因组长约11-12 kb,从3′~5′依次排列着核蛋白N、磷蛋白P、基质蛋白M、糖蛋白G以及大聚合酶蛋白L。在N基因3′端有不翻译的47个核苷酸的先导序列(leader),L基因5′端有59个核苷酸的拖尾序列(trailor)。


1. VSV病毒粒子和基因组示意图(TRENDS in Molecular Medicine Vol.10 No.5 May 2004

1.2 VSV的生活周期

VSV糖蛋白G介导病毒粒子与细胞表面受体结合,通过内吞作用进入细胞。随后通过pH介导膜融合,促使VSV基因组释放到细胞质中。感染病毒粒子内包装的LNP 共同构成的聚合酶复合物以基因组负链RNA为模板启动转录表达,复制,组装,出芽产生子代病毒。




2. VSV生活周期示意图(TRENDS in Molecular Medicine Vol.10 No.5 May 2004

2. VSV-dG病毒

可在表达框之间插入外源基因,在辅助质粒的协助下拯救出重组VSV病毒,重组的VSV病毒可在多种真核细胞中快速感染,例如:BHK-21Vero293T细胞等。利用反向遗传学技术,拯救出重组的VSV-dG-EGFP病毒、VSV-dG-mCherry病毒



3. 重组不同VSV病毒示意图



VSV-dG-mCherry



VSV-dG-mCherry

4. 重组不同VSV病毒感染BHK-21细胞示意图

3. VSV病毒载体优点

(1)安全,VSV病毒不会整合到宿主细胞基因组中,最终会被宿主免疫系统清除,是理想的病毒载体;

(2)有效,重组VSV病毒具有感染性,可在宿主细胞中内高效表达外源基因产物;

(3)操作方便,VSV载体易于分子操作和改造,并能恢复形成具有复制能力的重组VSV病毒,易于在多种细胞中培养,滴度可达108 PFU/mL以上。

4. VSV病毒载体应用

4.1应用于神经环路示踪



5. rVSV的顺行或逆行跨多突触案例(Mundell NA et al.2015

参考文献:


[1] van den Pol AN, Ozduman K, Wollmann G,et al. Viral strategies for studying the brain, including a replication-restricted self-amplifying delta-G vesicular stomatis virus that rapidly expresses transgenes in brain and can generate a multicolor golgi-like expression. J Comp Neurol. 2009 Oct 20;516(6):456-81.

[2] Beier KT, Saunders A, Oldenburg IA,et al. Anterograde or retrograde transsynaptic labeling of CNS neurons with vesicular stomatitis virus vectors. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Sep 13;108(37):15414-9.

[3] Mundell NA, Beier KT, Pan YA,et al.Vesicular stomatitis virus enables gene transfer and transsynaptic tracing in a wide range of organisms.J Comp Neurol. 2015 Aug 1;523(11):1639-63.

[4] Kevin T. Beier, Arpiar B. Saunders, Ian A. Oldenburg,et al. Vesicular stomatitis virus with the rabies virus glycoprotein directs retrograde transsynaptic transport among neurons in vivo. Front. Neural Circuits, 07 February 2013.


4.2应用于溶瘤病毒与免疫研究:



6.溶瘤病毒参与癌症免疫逃逸路径示意图(Kaufman HL et al. Nat Rev Drug Discov. 2016)

参考文献:

[1] Howard L. Kaufman, Frederick J. Kohlhapp ,et al.Oncolytic viruses: a new class of immunotherapy drugs.Nat Rev Drug Discov. 2015Sep;14(9):642-62.

[2] Kimpel J, Urbiola C, Koske I,et al.The Oncolytic Virus VSV-GP Is Effective against Malignant Melanoma.Viruses. 2018 Mar 2;10(3).

[3] Durham NM1, Mulgrew K1, McGlinchey K1,et al.Oncolytic VSV Primes Differential Responses to Immuno-oncology Therapy.Mol Ther. 2017 Aug 2;25(8):1917-1932.

4.3应用于病毒载体疫苗的研究:



7.VSV-dG用于SARS疫苗研发的案例Sagar U. Kapadia et al.Virology. 2008 )

参考文献:

[1] Kapadia SU1, Simon ID, Rose JK,et al. SARS vaccine based on a replication-defective recombinant vesicular stomatitis virus is more potent than one based on a replication-competent vector.Virology. 2008 Jun 20;376(1):165-72.

[2] Jean-François Gélinasa, Hiva Azizib, Sascha Kiesslicha,et al. Production of rVSV-ZEBOV in serum-free suspension culture of HEK 293SF cells.Vaccine 37 (2019) 6624–6632.

[3] Anahita Fathi, Christine Dahlke , Marylyn M,et al.Recombinant vesicular stomatitis virus vector vaccines for WHO blueprint priority pathogens.HUMAN VACCINES & IMMUNOTHERAPEUTICS 2019, VOL. 15, NO. 10, 2269–2285.



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