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技术与服务

稳定细胞株构建

技术简介

      稳定转染指将外源基因克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体上后,宿主细胞即可长期表达目的基因及蛋白,最终实现对特定基因/蛋白的过表达、敲入、敲低、敲除或点突变。该技术需要在瞬时转染基础上对靶细胞的抗性标志进行筛选,或者应用高转染效率的病毒,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 慢病毒感染方法较质粒转染方法更方便和高效,是目前主流的稳转细胞系构建方法。

      稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后,通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细胞中经细胞克隆挑选得到的,由一个细胞扩增得到的细胞株。单克隆细胞株性状统一,传代过程中细胞的基因表达保持稳定。

      枢密科技在瞬时转染以及慢病毒感染构建稳转细胞株上拥有丰富的经验。慢病毒采用三质粒系统转染293T细胞包装慢病毒颗粒,将Gag/Pol和载体分开,并且使用VSV-G的膜蛋白,包装出来的慢病毒宿主范围广,是基因转导的理想工具。

 

应用

1)具有报告基因细胞系的构建;

2)基因过表达服务;

3)基因沉默(siRNA/shRNA /microRNA)服务;
4)基因敲除/敲入/点突变(Crispr-Cas系统)服务;     


服务内容

1)载体构建:将外源基因构建到合适载体上,若需病毒转染,则包装病毒;

2)细胞接种:转染实验前天接种细胞,当细胞生长至60-80%汇合度时进行转染;

4)细胞转染:用构建好的载体(或包装好的病毒)转染目的细胞;

5)抗生素筛选;

6)鉴定筛选结果。


服务周期

1-2个月


客户提供

1)待处理细胞株(可代购)及培养方法;

2)含有目的基因的可直接用于转染的质粒(提供测序图谱,也可代构建,需另付费)或包装好的慢病毒(可代包装,需另付费);

3)本公司提供DMEM培养基/1640培养基,嘌呤霉素及G418抗生素,若需其他培养基及筛选条件,请客户一并提供。特殊基因客户需提供相应抗体以供检测。


最终交付

1)目的稳转细胞株;

2)对照稳转细胞株;

3)Western blot/qPCR原始结果;

4)详细实验报告。

 

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