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产品及应用

cre loxp flp等

Cre重组酶(Cyclization Recombination Enzyme)

最常用的位点特异DNA重组酶,克隆自噬菌体P1,由343个氨基酸组成。Cre的作用位点是34bpLoxP序列。一些LoxP突变体也能被Cre识别,包括Lox2272Lox511等,通常这些突变体只能与自身相同序列发生重组。任何序列的DNA,当其位于两个loxP位点之间的时候,在Cre重组酶的作用下要么被缺失(两个loxP位点的方向相同),要么方向发生倒转(loxP位点的方向相反)

Lox P(locus of X-over P1)

Cre酶的作用位点,长34bp,特征结构ATAACTTCGTATA - NNNTANNN -TATACGAAGTTAT。两边反向互补的13个碱基是Cre的识别序列,中间的8个碱基是重组发生的位置,只有序列相同才能发生重组。N代表可变的碱基,不同的碱基选择就造就了不同的Lox位点,常见的有Lox2272Lox511Lox5171LoxNLoxP等。

DIO,或者称DiO (Double-floxed inverse Orientation),是和Cre配合控制目的基因表达的元件,一般由两对互不相容的Lox序列组成,特征序列是Lox2722r-间隔1-LoxP-GOIr-Lox2722-间隔2-LoxPr。当有Cre存在时,任一对Lox序列都有可能发生重组,因为每对Lox都是相反方向的,所以重组会导致他们之间的序列发生颠倒,例如Lox2722先发生重组会形成Lox2722r-GOI-LoxPr-间隔1r-Lox2722-间隔2-LoxPr,这时两个LoxP的方向由之前的相反变成相同,它们之间发生第二次重组就会使Lox2722缺失,形成Lox2722r-GOI-LoxPr,由于Lox2722rLoxPr之间不能发生重组,目的基因的位置就固定下来。LoxP先发生重组,结果也是一样的。通常我们会插入目的基因使它的序列和启动子相反,也就是刚开始的时候不表达,Cre作用后目的基因开始表达。DIOFLEX是非常接近的,除了所用的间隔1和间隔2序列有所不同。DIO相反向里,Flex相反向外。

Flp(flippase)

常用的位点特异DNA重组酶,克隆自酿酒酵母,由423个氨基酸组成,Flp的作用位点是Frt。一些Frt突变体也能被Flp识别,包括F3等,通常这些突变体只能与自身相同序列发生重组。在同一个DNA分子上,根据发生重组的两个Frt序列的方向不同,处于这两个序列之间的序列会发生缺失或是颠倒。

Flpo是经过密码子优化的Flp,更适合哺乳动物细胞表达。

Frt(flippase recognition target)

Flp的作用位点,长48bp,特征序列是GAAGTTCCTATTCcGAAGTTCCTATTCtctagaaaGtATAGGAACTTC,后34个碱基是其核心序列,前14个碱基是整合反应发生必须的,也就是两个独立DNA分子之间的重组。后34个碱基中,左右两边13个碱基是Flp的结合位点,中间8个碱基决定了重组的特异性,其中的一些碱基是可以改变的,不同的碱基组合形成了具有异种特异性Frt突变体,包括F3F5等。

fDIO或者称fDiO (Flp controled Double-floxed inverse Orientation)

Flp配合控制目的基因表达的元件,一般由两对互不相容的Frt序列组成,特征序列是Frt-间隔1-Frt5-GOIr-Frtr-间隔2-Frt5r。当有Flp存在时,任一对Frt序列都有可能发生重组,因为每对Frt都是相反方向的,所以重组会导致他们之间的序列发生颠倒,例如Frt先发生重组会形成Frt-GOI-Frt5r-间隔1r-Frtr-间隔2-Frt5r,这时两个Frt5的方向由之前的相反变成相同,它们之间发生第二次重组就会使Ftrr缺失,形成Frt-GOI-Frt5r,由于FrtFrt5之间不能发生重组,目的基因的位置就固定下来。Frt5先发生重组,结果也是一样的。通常我们会插入目的基因使它的序列和启动子相反,也就是刚开始的时候不表达,Cre作用后目的基因开始表达。

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