基因过表达-服务武汉枢密脑科学技术有限公司

基因过表达

基因过表达载体是将目的基因编码区序列（CDS）克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用骨架上构建的启动子驱动目的基因表达，此外，可选择报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。构建基因表达载体的目的是使目的基因能在受体细胞中表达和发挥作用。

随着科学技术水平的提高，对载体提出了更高的要求，如：高拷贝数、具有强启动子和稳定的mRNA、具有高的分离稳定性和结构稳定性、转化频率高、宿主范围广、插入外源基因容量大且可以重新完整地复制与转录、和宿主细胞匹配等。此外，载体在宿主不生长或低生长速率时仍能高水平地表达目的基因。但达到上述要求的载体很少，尤其是当动物细胞作为宿主细胞时。

目前最常用的载体是质粒和病毒。几种常用载体的特点见下表。研究者可根据自身的研究需求选择合适的载体。

	质粒	慢病毒	腺病毒	腺相关病毒
外源基因表达时间	24h开始表达持续3-7天	2-4天开始表达长时间稳定表达	1-2天开始表达持续7-14天	7-14开始表达细胞分裂不旺盛部位可长时间表达
插入片段大小	<5-8kb	<4kb	<5-8kb	<2.8kb(包括必须的启动子以及荧光或者标签元件)
稳定细胞株筛选	可以，但较难操作	可以，外源基因整合于主基因组，筛选简单	不可以，瞬时表达外源基因传代后效果减弱	不可以
细胞实验	细胞系，部分细胞转染效率较低	首选，广谱，感染效率高	广谱，感染效率高，适合原代非增殖细胞感染	不适合细胞实验
动物实验	不适合	适合，根据观察时间和注射部位选择	较适合(免疫原性高)，根据观察时间和注射部位选择	首选，根据观察时间和注射部位选择
滴度	无	最高可达10⁹TU/ml	高达10¹² pfu/ml	高达10^12-13 v.g/ml

应用研究

1. 研究基因调控及蛋白结构和功能；

2. 稳定过表达细胞系构建；

3. 生物治疗药物的发现和结构研究。

服务优势

1. 多种优质的哺乳动物、昆虫、酵母、细菌表达系统可选择；

2. 筛选标签种类丰富，便于进行各类实验；

3. 标签蛋白类型多样；

4. 高滴度、高质量；

5. 实验周期短。

服务说明

客户提供

1. 基因名称、种属、何种isform，是否已克隆？

2. 选用的表达载体：质粒或病毒；

3. 启动子选择：广谱、组织特异性表达或条件诱导型启动子；

4. 抗性标记基因选择：潮霉素（Hygromycin）、新霉素（neomycin）、嘌呤霉素（puromycin）；

5. 标签蛋白的融合表达：His，Myc、GFP或不加标签；

6. 宿主细胞类型：原代细胞或细胞株；

7. 是否进行单克隆稳转细胞系筛选。

服务流程

服务周期

2-4周

最终交付

1.含目的基因的过表达载体/细胞系；

2.载体图谱、测序结果；

3.详细实验报告。