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钙成像

钙成像AAV病毒rAAV-CaMKIIα-GCaMP6m

仅供科研使用

使用前请仔细阅读说明书

病毒用途:钙离子成像技术(Calcium imaging system)属于光遗传学技术中的一类,实际检测的是细胞或组织中Ca2+的浓度变化,将钙浓度变化转化为荧光信号。且钙离子是细胞信号传导中的重要信使,从而通过荧光信号强度变化来检测神经元的活动。
rAAV: Recombinant adeno-associated virus, 重组腺相关病毒。以重组腺相关病毒为载体,安全性高(目前还没有发现rAAV对人体致病),免疫原性低(感染后很少被免疫系统所清除),表达时间长。
CaMKIIα:Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II,兴奋性神经元启动子。
GCaMP蛋白:由cpGFP蛋白、CaM(calmodulin钙调蛋白)、M13肽这三个结构组成,当有钙离子存在时,CaM和M13结合,连带引起cpGFP蛋白的构象,增强荧光信号。在实验中用于指示细胞中的Ca信号活动,又被称为GeCI (genetically encoded calcium indicator)。GCaMP6是新一代的GCaMP蛋白,它的钙指示功能达到甚至超过了常用的化学钙指示剂。它有三种常用的亚型,6s,6f和6m,其中对于钙离子的结合力,6s>6m>6f,所以6s最敏感,适合低频信号的指示,6f解离最快,适合高频信号的指示,6m结合活性适中,适用的范围最广。GcaMP6是一种超灵敏的荧光蛋白,可以特异高效地反映细胞内游离Ca2+浓度的变化,在活体下,对单个动作电位诱发的钙信号,GCaMP6比GCaMP3强10倍,动力学快2倍。因此GcaMP6荧光蛋白可以作为一种超敏Ca2+探针,用于研究生理和病理情况下外界因素对活细胞内Ca2+的影响。

GCaMP6s   slow     光强最强,更晚淬灭(低频最敏感)

GCaMP6m  medium  光强和淬灭中等(中等)

GCaMP6f   fast      光强较弱,更快淬灭(高频)

保存:

1.4℃短期保存;-80℃长期保存;每冻融一次,滴度降低10%,应避免反复冻融  

2.病毒于-80℃可长期保存 6个月以上;但如果病毒储存时间超过 6个月,建议在使用前重新测定病毒滴度。

注意事项:

病毒稀释和分装

1.根据实验需要,病毒可适当稀释且分装成每次实验所需体积

2.用无菌离心管和枪头进行分装操作

3.推荐戴手套和护目镜进行操作

4.病毒稀释分装需在冰上操作

病毒储存:

1.检查超低温冰箱是否正常运转,尽可能快速完成存放操作

2.使用具有隔温功能的手套,防止被干冰或冰箱内物品冻伤

3.接触装有病毒的离心管时需戴一次性手套或橡胶手套

操作条件:

rAAV是复制缺陷的假病毒载体,安全无害。但使用者在操作中也需要保持一定的警惕性,一般情况下可在BSL-1中操作,对于携带致病基因或有害因子基因的AAV载体则应归BSL-2

灭活:

1%次氯酸钠,2%戊二醛,0.25%十二烷基硫酸钠,高温高压等处理方式。

温馨提示:

请在签收病毒时检查和确认:

a、外包装是否完整      b.干冰是否有剩余    c.其他可疑现象

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