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细胞周期

细胞周期-PI染色

细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。细胞周期反应了细胞增殖速度。PI(碘化丙锭):可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA酶将RNA消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。

细胞周期各时相的DNA含量不同:

G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N);

G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N);

S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间(2N-4N)。

实验步骤

DAY1

制备单细胞悬液,加到六孔板,10x104 cells/孔

DAY2

加药处理12小时,每组3复孔

DAY3

收集细胞,用预冷的PBS洗一次;

预冷的70%乙醇(PBS配制)重悬,放在4 度固定过夜(可以放在-20长期保存)。

DAY4

配制染色液;

碘化丙啶染色液的配制:参考下表,根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液
1个样品 6个样品 12个样品
染色缓冲液 0.5ml 3ml 6ml
碘化丙啶染色液(20X) 25μl 150μl 300μl
RNase A (50X) 10μl 60μl 120μl
Final volume 0.535ml 3.21ml 6.42ml
注:配制好的碘化丙啶染色液短时间内可以4℃保存,宜当日使用。

固定好的细胞1000g离心5min;

预冷的PBS洗一次;

染色液重悬细胞,37℃孵育 30min;

4 度保存,当日流式检测,488nm激发波长。

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