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细胞周期

细胞周期-PI染色

      细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,分为间期与分裂期两个阶段。细胞周期反应了细胞增殖速度。PI(碘化丙锭):可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA酶将RNA消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。

      细胞周期各时相的DNA含量不同: 

            G0/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N);

            G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N);

            S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间(2N-4N)。

实验步骤:

DAY1

      制备单细胞悬液,加到六孔板,10x104 cells/孔

DAY2

      加药处理12小时,每组3复孔

DAY3

      收集细胞,用预冷的PBS洗一次;

      预冷的70%乙醇(PBS配制)重悬,放在4 度固定过夜(可以放在-20长期保存)。

DAY4

      配制染色液;

      固定好的细胞1000g离心5min;

      预冷的PBS洗一次;

      染色液重悬细胞,37℃孵育 30min;

      4 度保存,当日流式检测,488nm激发波长。



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