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技术与服务

蛋白质糖基化分析

蛋白质糖基化分析

服务简介

      翻译后修饰是指由于共价键作用或者某些酶的催化,蛋白质在侧链或者某些位点发生的基团修饰,蛋白质翻译后修饰主要包括乙酰化、磷酸化、泛素化、糖基化等,它们在细胞信号转导等生物过程中起到非常重要的作用。

      糖基化修饰不仅影响着蛋白质的空间构象、生物活性、运输和定位,在分子识别、细胞通信、信号转导等特定生物过程中发挥着至关重要的作用。糖蛋白根据其糖链结构及糖基化位点主要有N-糖蛋白与O-糖蛋白两大类。随着质谱分辨率的不断提高和生物信息学的不断发展,质谱已广泛应用于糖基化解析,通常先利用酶切或化学手段将糖链从糖蛋白释放,再分别进行糖基化位点的鉴定和糖链结构的解析。

      由于糖基化修饰的蛋白质在生物样本中含量低、动态范围广,质谱分析前需要对糖基化肽段进行富集以提高其丰度,然后利用利用新一代组合型质谱Orbitrap Fusion具有的HCD/ETD“双碎裂模式”解析复杂糖蛋白的完整糖肽,利用Byonic软件对质谱原始数据解析,实现对N-糖基化位点和O-糖基化位点的鉴定,并对相应位点携带的糖链组成进行分析。

技术特点

      1、采用主流凝集素亲和法富集糖基化肽段,特异性高,富集效率好;

      2、利用新一代组合型质谱Orbitrap Fusion具有的HCD/ETD“双碎裂模式”解析复杂糖蛋白的完整糖肽,利用Byonic软件对质谱原始数据解析,实现对糖基化位点的鉴定。

技术流程

       接收样品——蛋白质提取——肽段酶解——糖基化肽段富集——HPLC分离——LC-MS/MS——数据分析——结果交付

应用领域

      1、药物作用靶点研究

      2、疾病标志物筛选

      3、植物胁迫/抗逆研究

      4、作用机制研究

      5、要求物种具有蛋白质参考数据库、EST序列(转录组)或基因组注释信息

样本要求

表1

      1、蛋白样品:蛋白提取时使用普通的组织、细胞裂解液即可

      2、样品运输:足量干冰运输,尽量选用较快的邮递方式,减少运输过程中样品降解

项目报告

      中英文双语版技术报告,报告包括:
      1、实验步骤(中英文)
      2、相关的质谱参数(中英文)
      3、鉴定的糖基化位点的详细信息
      4、质谱图片
      5、原始数据

      6、生物信息分析

生物信息分析包括:

      1、修饰蛋白、修饰位点鉴定

      2、鉴定结果特征分布

      3、肽段长度、蛋白覆盖度分布、unique肽段分布

      4、修饰位点motif预测

      5、蛋白质GO功能分类、COG注释、Pathway通路注释

      6、蛋白质网络互作预测(高级分析)

      7、蛋白质Domain预测(高级分析)

      8、蛋白质亚细胞定位(高级分析)

一站式服务

      下单寄送样品,一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告。

服务周期

      自送样起******个工作日。



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