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技术与服务

iTRAQ定量蛋白质组分析

iTRAQ定量蛋白质组分析

服务简介

      定量蛋白质组学就是把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有的蛋白质进行精确的定量和鉴定。定量蛋白质组学技术主要分为标记(Label)和非标记(Label Free)定量,标记策略分为体内标记,如SILAC标;体外标记,如iTRAQ和TMT标记等。
      iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技术是分别由美国AB Sciex公司和Thermo Fisher公司开发,这两种多肽体外标记定量技术采用2-10个稳定同位素标签,特异性标记多肽的氨基基团进行MS/MS分析,能同时比较多达10种不同样本中蛋白质的相对含量。
      iTRAQ/TMT试剂由报告基团、平衡基团和反应基团等三部分组成。经iTRAQ/TMT试剂标记酶解所得肽段,在一级质谱图中,来自于不同样本的同一肽段,表现为相同的质荷比,选定此质谱峰进行碎裂后,在二级质谱检测中,不同的报告基团被释放,它们各自的质谱峰的信号强弱,代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。
技术特点 
     1、高效:多达10个样品并行分析,适合大量临床样本,多对照组大规模实验
     2、灵敏:可检测较低丰度蛋白,大范围比较蛋白相对丰度
     3、通用:体外标记,适用于分析组织、细胞、血液等多种样品
     4、拓展:可与肽段修饰分析联用,更准确研究翻译后修饰变化
技术流程
      接收样本——蛋白酶解——iTRAQ标记——样品混合——HPLC分组分——LC-MS/MS——数据解析——结果交付
应用领域

      1、机理和调控机制研究

      2、动态过程中机制研究

      3、疾病标志物的筛选

      4、用药及预后标志物筛选

      5、药物作用靶点研究

      6、特殊功能蛋白质筛选

样本要求


表1 

     (1)请使用足量的干冰运输,尽量选用较快的邮递方式,以减少运输过程中样品降解。

     (2)建议送原始样本,除非客户已经熟练掌握蛋白质组学的蛋白提取方法。
     (3)动物组织样品:湿重不低于200 mg,无溶血,软骨或骨头等样本,不低于400mg。
     (4)细胞样品:收集细胞沉淀PBS冲洗3遍,送样量为1×107或细胞沉淀不少于50 μl。
     (5)培养基上清液:需保证无菌体或细胞,可浓缩后寄送;不少于10 ml。
     (6)血清样品:新鲜血液于4℃,2000 g离心15 min,取上清;不少于500 μl;无溶血。
      (7)若客户直接提供蛋白样品,则蛋白量不少于1 mg,浓度不低于2 mg/mL。
项目报告 
      中英文双语版技术报告,内容包括:
      1. 实验步骤
      2. 相关的质谱参数
      3. 质谱图片 
      4. 原始数据
      5. 蛋白差异水平分析
      6. 生物信息学分析
生物信息学分析 
     (1)质谱图分析,蛋白质数据质量评估
     (2)多组分样本PCA分析
     (3)鉴定的蛋白功能注释:GO功能注释、 KEGG功能注释和COG功能注释
     (4)差异表达蛋白统计分析:韦恩图、火山图(Volcano Plot)
     (5)差异表达蛋白聚类分析:层次聚类、K-means聚类
     (6)差异蛋白相互作用分析:基于STRING 数据库进行蛋白互作网络分析
一站式服务 
      下单寄送样品,一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告。
服务周期
      自送样起******个工作日。

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