细胞自噬研究

实验简介

      细胞自噬是细胞在自噬相关基因(autophagyrelated gene，Atg)的调控下通过溶酶体与双层膜包裹的细胞自身物质融合，从而降解细胞自身物质的过程。细胞通过自噬清除不需要的或功能失常的物质如蛋白质、细胞器以及各种细胞组分，从而维持细胞内环境的动态平衡。

      细胞自噬大致可分为以下几个阶段：膜泡的形成与扩展，自噬体形成，自噬溶酶体形成，内含物被溶酶体消化。

https://labs.feinberg.northwestern.edu/congconghe/home/

服务内容

1.免疫法检测细胞自噬相关蛋白（Atg家族，mTOR，Akt，PI3K等）

      Atg是细胞自噬过程中的关键因子，Atg家族蛋白彼此形成复合物，在细胞自噬的各个阶段起作用。Akt/PI3K是调控细胞自噬的关键信号通路，通路中mTOR能够抑制某些Atg活性从而抑制自噬体形成。

      检测手段: western blot，免疫荧光，免疫组化，ELISA，流式.....等免疫方法。

2. 荧光蛋白标记追踪LC3

      LC3（Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3）普遍存在于哺乳动物细胞，自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。

      利用FP-LC3融合蛋白追踪自噬体，无自噬时，FP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中；自噬形成时，FP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。（FP：荧光蛋白）

副溶血弧菌株POR3诱导Hela细胞自噬（PI:蛋白质抑制剂；Wortmannin：PI3K抑制剂）Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Aug 26;105(34):12497-502.

3. 电镜观察自噬体形成

      自噬体的特征为：双层或多层膜的液泡状结构，内含胞浆成分，如线粒体、内质网、核糖体等。

HeLa cells were treated with 2.5μM tunicamycin for 6 h Methods Mol Biol. 2008;445:29-76.

服务原则

      1.重复3次独立实验；

      2.设立正确合适的对照；

      3. 严格遵循随机性原则。

实验周期

根据细胞生长状态或实验特殊需求实验周期可能延长

客户提供

      待研究的细胞（可由本公司代购）

交付内容

      1. 原始实验数据

      2. 完整的实验报告（包括实验原理，材料，详细步骤，结果，结论）

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