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技术与服务

自噬

细胞自噬研究

实验简介

      细胞自噬是细胞在自噬相关基因(autophagyrelated gene,Atg)的调控下通过溶酶体与双层膜包裹的细胞自身物质融合,从而降解细胞自身物质的过程。细胞通过自噬清除不需要的或功能失常的物质如蛋白质、细胞器以及各种细胞组分,从而维持细胞内环境的动态平衡

      细胞自噬大致可分为以下几个阶段:膜泡的形成与扩展,自噬体形成,自噬溶酶体形成,内含物被溶酶体消化。

https://labs.feinberg.northwestern.edu/congconghe/home/

服务内容

1.免疫法检测细胞自噬相关蛋白(Atg家族,mTOR,Akt,PI3K等)

      Atg是细胞自噬过程中的关键因子,Atg家族蛋白彼此形成复合物,在细胞自噬的各个阶段起作用。Akt/PI3K是调控细胞自噬的关键信号通路,通路中mTOR能够抑制某些Atg活性从而抑制自噬体形成。

      检测手段: western blot,免疫荧光,免疫组化,ELISA,流式.....等免疫方法。

2. 荧光蛋白标记追踪LC3

      LC3(Microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3)普遍存在于哺乳动物细胞,自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。

      利用FP-LC3融合蛋白追踪自噬体,无自噬时,FP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,FP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。(FP:荧光蛋白)

副溶血弧菌株POR3诱导Hela细胞自噬(PI:蛋白质抑制剂;Wortmannin:PI3K抑制剂)Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Aug 26;105(34):12497-502.

3. 电镜观察自噬体形成

      自噬体的特征为:双层或多层膜的液泡状结构,内含胞浆成分,如线粒体、内质网、核糖体等。

HeLa cells were treated with 2.5μM tunicamycin for 6 h Methods Mol Biol. 2008;445:29-76.

服务原则

      1.重复3次独立实验;

      2.设立正确合适的对照;

      3. 严格遵循随机性原则。

实验周期


根据细胞生长状态或实验特殊需求实验周期可能延长

客户提供

      待研究的细胞(可由本公司代购)

交付内容

      1. 原始实验数据

      2. 完整的实验报告(包括实验原理,材料,详细步骤,结果,结论)

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